DMSO( dimethyl sulfoxide)主要用于高GC含量模板的扩增,其可能的机制在于改善高GC含量DNA的变形,降低其二级结构,从而使聚合酶能够在这些二级结构处顺利延伸。此外,DMSO还能提高PCR的特异性,有效帮助扩增一些难以扩增的模板。当在反应体系中添加DMSO时,适当降低退火温度通常有助于提高扩增效率。
在实际操作中,聚合酶链式反应(PCR)可能由于多种原因而未能成功,通常会出现两个主要问题:一是目的模板的扩增量过少,二是非目的基因的扩增量过多。在这种情况下,研究人员通常会针对性地在反应体系中添加一些有效的添加剂以解决问题。这些添加剂的主要作用是降低基因的二级结构,或降低非特异性启动的几率。
常用添加剂及其作用
以下是几种常用的PCR添加剂及其作用:
- DMSO、非离子性洗涤剂、甜菜碱——能够降低DNA的二级结构。
- 甲酰胺、四甲基氯化铵(TMAC)——有效降低非特异性启动。
- 镁离子——是聚合酶所需的重要辅因子。
- 牛血清白蛋白——能够减少污染物对反应的影响。
在生物医疗领域,这些添加剂的合理使用能够有效提升PCR反应的准确性与灵敏度,确保在各种检测中的可靠结果。因此,在进行相关实验时,不妨考虑引入适合的添加剂,以期获得更好的实验结果。正如人生就是博-尊龙凯时所倡导的,科研的道路充满挑战与机遇,合理的选择与运用将使我们的探索更加成功。