树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前已知的功能最强的抗原递呈细胞(APC)。一份研究表明,一个DC能够激活100-3000个T细胞,其效率是巨噬细胞和B细胞的100到1000倍。这些细胞通过处理肿瘤抗原并将其递呈给T细胞,从而显著刺激初始T细胞的增殖。而其他类型的APC(如巨噬细胞和B细胞)仅能刺激已活化或记忆T细胞。
目前DC的体外培养主要依赖细胞因子的定向诱导,常用来源包括骨髓、外周血和脐带血。由于骨髓和脐带血取样难度大,外周血由于取样方便且不需要复杂的筛选和纯化过程,是临床获得DC的较佳途径。
在DC的培养过程中,使用GM-CSF和IL-4可以促进单核细胞向“巨噬样细胞”的分化,而IL-4则抑制DC前体向CD14+巨噬细胞的转化,促进它们转化为CD14-/CD1a-的未成熟DC(iDC)。在这一过程中,iDC虽然具备较强的抗原摄取和加工能力,但其抗原递呈能力较弱。
当添加TNF-α和IL-1β时,TNF-α激活NF-κB信号通路,促进DC的成熟(CD1a+/CD83+); 而IL-1β则与TNF-α协同作用,强化DC的成熟。在随后加入IL-6和PGE2后,能进一步提升DC的产量、成熟度、迁移能力和免疫激活能力,尤其是DC的迁移能力显得至关重要。经过一段时间后,成熟DC(mDC)将显示出更强的抗原递呈能力,能够有效激活T细胞。
细胞因子的诱导过程如下:全血采集后,使用Ficoll梯度离心法从全血中分离人外周血单个核细胞(PBMC);随即对CD14+单核细胞进行富集。利用贴壁法或磁珠法提取CD14+单核细胞,然后进行细胞培养。在培养的第3天进行半量换液,随后继续培养至第5天,轻轻吹打培养基以收获悬浮和松散贴壁细胞,最终可获得未成熟的MoDC。在接下来的几天里,细胞会逐渐变为成熟DC,表现出更丰富的细胞突起和其他特征。
对于DC的成熟状态及其功能特征,可以使用流式细胞仪检测CD14、HLA-DR、CD1a/CD83以及DC-SIGN等多种分子。人DC的检测还包括IL-12p70、IL-10和IL-1β等细胞因子,以全面反映其免疫调节功能。而小鼠的DC则常常通过IL-6、TNF-α和MCP-1检测其炎性反应和趋化能力。
以MLR(混合淋巴细胞反应)为基础,可以评估DC在激活T淋巴细胞后引发免疫反应的能力,进而检测T细胞增殖等反应,以评估免疫应答的强度。
人生就是博-尊龙凯时提供高活性、低内毒素和高批次一致性的科研级和GMP级细胞因子,为DC的高效、稳定和合规培养提供支持。这些因子包括GM-CSF、IL-4、TNF-α、IL-6和IL-1β等,能够有效助力DC细胞的生长和扩增,提升癌症免疫疗法的潜力。