四环素类检测方法与应用

1. 原理与用途

本试剂盒基于间接竞争酶联免疫法（ELISA），主要用于检测组织、蜂蜜、鸡蛋等样品中的四环素类药物（Tetracyclines, TCs）。试剂盒包括预包被偶联抗原的酶标板、辣根过氧化物酶标记物、特异性抗体、标准品及其他相关配件。检测过程为样品或标准品加入后，样本中的四环素类药物与酶标板上预包被的偶联抗原竞争抗体结合。随后，添加酶标记物，通过TMB底物显色进行测定，最终吸光度值与样品中四环素类药物的含量呈负相关，借助标准曲线进行定量分析。

2. 技术指标

2.1 检测灵敏度

• 灵敏度：0.05 ppb (ng/ml)

2.2 反应模式

• 反应温度：37℃，反应时间：30分钟

2.3 检测下限

• 组织、肝脏、鸡蛋：2 ppb
• 蜂蜜、牛奶：2 ppb
• 尿样：0.5 ppb
• 奶粉：4 ppb

2.4 交叉反应率

• 四环素：100%
• 强力霉素：70%
• 金霉素：10%
• 土霉素：10%

2.5 样本回收率

• 组织：85±20%
• 肝脏、鸡蛋：75±20%
• 蜂蜜：85±20%
• 尿样：80±20%
• 牛奶、奶粉：75±20%

3. 试剂盒组成

试剂盒包含以下组件：

• 酶标板（96孔）
• 1瓶高浓度标准品溶液（100 ppb，需密封保存）
• 标准品溶液：0 ppb、0.05 ppb、0.1 ppb、0.2 ppb、0.4 ppb、0.8 ppb（现配现用）
• 酶标记物（红盖）
• 抗体工作液（蓝盖）
• 底物液A（白盖）
• 底物液B（黑盖）
• 终止液（黄盖）
• 20×浓缩洗涤液（白盖）
• 5×复溶液（黄盖）
• 使用说明书
• 盖板膜
• 自封袋

4. 所需设备与试剂

4.1 设备

• 酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、移液管、天平（感量0.01 g）

4.2 微量移液器

• 单道：20 µl-200 µl，100 µl-1000 µl；多道：300 µl

4.3 试剂

• 浓盐酸、无水甲醇

5. 样本前处理

5.1 样本处理前注意事项

实验器具必须清洁，且应使用一次性吸头，以避免污染和干扰实验结果。

5.2 配液准备

• 复溶液：将5×复溶液用去离子水稀释5倍（1份复溶液加4份去离子水），4℃保存可达一个月。
• 工作洗涤液：将浓缩洗涤液20倍稀释（1份洗涤液加19份去离子水）。
• 样本提取液：将43 mL浓盐酸与去离子水混合均匀后定容至50 mL，再加入450 mL无水甲醇。

5.3 样本处理步骤

• 组织、肝脏、鸡蛋样本：将1±0.05 g均质后的样本加2 mL样本提取液，振荡2分钟后离心，取上层液与复溶液混匀。
• 蜂蜜样本：将1±0.05 g蜂蜜加1 mL样本提取液，振荡混匀，取上层液与复溶液混匀。
• 尿样本：用复溶液将尿样10倍稀释，清亮的尿样则可用于分析。
• 牛奶样本：吸取1 mL牛奶，加2 mL样本提取液，离心后取上层液与复溶液混匀。
• 奶粉样本：将1±0.05 g奶粉加4 mL样本提取液，离心后取上层液与复溶液混匀。

6. 酶联免疫实验步骤

将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，放置于室温平衡30分钟，确保洗涤液中的结晶充分溶解。取出所需微孔板，未使用的部分应妥善保存。配制标准液，确保其在使用时保持稳定。加样后依次加入抗体工作液，进行密闭反应。之后通过多次洗涤，加入标记物、底物，显色后用酶标仪测定吸光度值。

7. 结果分析

通过计算标准液的百分吸光率，将样本的吸光度值代入标准曲线中，乘以稀释倍数即可得样本中待测物的实际浓度。这一方法非常适合大批量样本的快速、准确分析，助您掌握药物残留监测的新技术。

8. 注意事项

实验室环境应该保持在25℃以上，并避免使用过期试剂盒。所有操作过程中，也需注意避免试剂的污染和交叉反应，以确保试验的准确性与再现性。

9. 贮藏和保质期

请将试剂盒于2-8℃环境保存，避免冷冻，且保质期为1年。详细的生产日期可查阅包装盒。