大鼠肝星形细胞（THSC）培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肝星形细胞THSC

生长特性：适合于无血清冻存液。培养体系采用DMEM。

传代建议：首次传代比例为1:2。

传代情况：每两天更换培养液。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以备用于对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完整培养基【人生就是博-尊龙凯时】。

二、细胞接收处理

在细胞恢复良好状态后，请灌满完整培养液并封闭瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况并拍照保存不同倍数（推荐40x、100x、200x各一张），前三天的照片为重要的售后依据；若未提供照片，默认细胞状态良好。传代后，建议一瓶采用原瓶的完整培养基，另一瓶使用自行配制的培养基，以便进行对比培养，换液后请轻松拧松瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，将瓶内的完整培养液收集至离心管中，保留5ml培养基放于37℃、5%CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，请按以下步骤传代：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞情况，当大多数细胞呈圆形并开始脱落时，迅速取回操作台，轻轻敲击培养瓶，再添加超过5ml的完整培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞至完全脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟。弃去上清液后，补加1-2ml完整培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按照1:2的比例分装于两个T25瓶中，补充新的完整培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加入5ml完整培养基，以终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，随后将悬液转移至15ml离心管中，在1000rpm下离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如果后续要转入液氮罐中，请在-80℃保存24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中不再有结晶，然后用75%酒精擦拭外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完整培养基的15ml离心管中，在1000rpm下离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀再用5ml完整培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养；
4. 第二天更换为新鲜的完整培养基并继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。若脱落较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，在1000rpm下离心5分钟，随后利用上清进行过渡培养。对沉淀细胞加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，再加入5ml完整培养基以终止反应。再次离心并加1-2ml完整培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完整培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题时可重发的情形：细胞在运输过程中出现的丢失、瓶身破损或严重漏液情况；细胞污染请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后重发；常温运输细胞静置24小时后，干冰冻存细胞复苏24小时内，若绝大部分细胞未存活且提供真实清晰的细胞状态照片，予以重发；干冰运输的细胞如复苏后及常温的细胞静置后出现污染的，也可重发；细胞活性问题需在收到产品7天内提供实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发；以及在收到当天及第2、3天内拍照，超时将视为合格；若在4-7天内出现问题，需提供前三天的照片及详细操作步骤，如与技术人员沟通后被判定为我方责任，则予重发；如判定为双方责任，将协商解决或按合同价的50%收费重发。
2. 细胞出现问题时不予重发的情况：因客户造成的细胞污染；客户不当操作导致细胞状态不良；使用非推荐细胞培养体系导致的细胞状态不佳；细胞状态不佳且未提供前三天照片；在培养过程中经过其它处理的细胞；收到后2天内未告知的情况；及视具体情况而定。

我们始终致力于为您提供优质的细胞培养解决方案，正如人生就是博-尊龙凯时所倡导的那样，携手并进，探索生命科学的无尽可能。